Batas deteksi kuantitatif. Batas kuantitasi. XI. Penyajian data

KAMPUS

LARUTAN

Sesuai dengan Pasal 30 Perjanjian Uni Ekonomi Eurasia tanggal 29 Mei 2014 dan ayat 2 Pasal 3 Perjanjian Prinsip-prinsip Umum dan Aturan Peredaran Obat-obatan dalam Kerangka Uni Ekonomi Eurasia tanggal 23 Desember 2014 , Dewan Komisi Ekonomi Eurasia

diputuskan:

1. Menyetujui Pedoman terlampir untuk validasi metode analisis pengujian produk obat.

2. Keputusan ini mulai berlaku setelah 6 bulan sejak tanggal diumumkan secara resmi.

Ketua Dewan
Komisi Ekonomi Eurasia
T.Sargsyan

Panduan Validasi Metode Analisis Pengujian Narkoba

DISETUJUI
Dengan keputusan Dewan
Komisi Ekonomi Eurasia
tanggal 17 Juli 2018 N 113

I. Ketentuan Umum

1. Panduan ini menjelaskan aturan validasi metode analisis untuk pengujian produk obat, serta daftar karakteristik yang akan dinilai selama validasi metode ini dan dimasukkan dalam berkas registrasi yang diserahkan ke badan resmi negara anggota. Uni Ekonomi Eurasia (selanjutnya masing-masing disebut sebagai negara anggota).

2. Tujuan validasi prosedur analitis untuk pengujian produk obat adalah konfirmasi terdokumentasi tentang kesesuaiannya untuk tujuan yang dimaksudkan.

II. Definisi

3. Untuk keperluan Panduan ini, digunakan konsep-konsep yang memiliki arti sebagai berikut:

"prosedur analitis" - suatu metodologi untuk menguji produk obat, yang mencakup penjelasan rinci tentang urutan tindakan yang diperlukan untuk melakukan uji analitis (termasuk deskripsi persiapan sampel uji, sampel standar, reagen, penggunaan peralatan, konstruksi kurva kalibrasi, rumus perhitungan yang digunakan, dll.);

“reprodusibilitas” adalah sifat yang mencirikan presisi dalam uji antar laboratorium;

“kisaran penerapan (area analitik)” (kisaran) - interval antara konsentrasi (jumlah) analit tertinggi dan terendah dalam sampel (termasuk konsentrasi ini), yang prosedur analitiknya terbukti memiliki tingkat presisi yang dapat diterima , akurasi dan linearitas;

“linearitas” adalah ketergantungan sinyal analitik yang berbanding lurus dengan konsentrasi (jumlah) analit dalam sampel dalam rentang penerapan (area analitik) teknik;

"pemulihan" (pemulihan) - rasio antara nilai rata-rata yang diperoleh dan nilai (referensi) sebenarnya, dengan mempertimbangkan interval kepercayaan yang sesuai;

"pengulangan (presisi intra-pengujian)" - ketepatan suatu metode ketika pengujian berulang dilakukan dalam kondisi operasi yang sama (misalnya, oleh analis atau kelompok analis yang sama, pada peralatan yang sama, dengan reagen yang sama, dll.) untuk jangka waktu singkat;

"kebenaran" (akurasi, kebenaran) - kedekatan antara nilai sebenarnya (referensi) yang diterima dan nilai yang dihasilkan, yang dinyatakan dengan nilai keterbukaan;

"batas kuantisasi" - jumlah terkecil suatu zat dalam sampel yang dapat diukur dengan presisi dan akurasi yang sesuai;

"batas deteksi" - jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi, namun belum tentu dapat diukur secara akurat;

"presisi" (presisi) - ekspresi kedekatan (derajat penyebaran) hasil (nilai) antara serangkaian pengukuran yang dilakukan pada beberapa sampel yang diambil dari sampel homogen yang sama, dalam kondisi yang ditentukan oleh metode;

"presisi menengah (intralaboratorium)" (presisi menengah) - pengaruh variasi dalam laboratorium (hari yang berbeda, analis yang berbeda, peralatan yang berbeda, seri (lot) reagen yang berbeda, dll.) pada hasil pengujian sampel identik yang diambil dari laboratorium seri yang sama;

"spesifisitas" - kemampuan teknik analisis untuk mengevaluasi zat yang ditentukan secara jelas, terlepas dari zat lain (pengotor, produk degradasi, eksipien, matriks (medium), dll.) yang ada dalam sampel uji;

“kekokohan” adalah kemampuan suatu teknik analisis untuk tahan terhadap pengaruh perubahan kecil tertentu dalam kondisi pengujian, yang menunjukkan keandalannya dalam penggunaan normal (standar).

AKU AKU AKU. Jenis metode analisis yang akan divalidasi

4. Panduan ini membahas pendekatan validasi 4 jenis metode analisis yang paling umum:

a) tes identifikasi (keaslian);

b) pengujian untuk mengetahui kandungan pengotor secara kuantitatif (uji kuantitatif kandungan pengotor);

c) pengujian untuk menentukan kandungan maksimum pengotor dalam sampel (pengujian batas untuk pengotor kontrol);

d) uji kuantitatif (untuk kandungan atau aktivitas) untuk menentukan bagian aktif molekul zat aktif dalam sampel uji.

5. Semua metode analisis yang digunakan untuk mengendalikan mutu produk obat harus divalidasi. Panduan ini tidak mencakup validasi metode analisis untuk jenis pengujian yang tidak termasuk dalam paragraf 4 Pedoman ini (misalnya, pengujian disolusi atau penentuan ukuran partikel (dispersi) suatu bahan farmasi, dll.).

6. Uji identifikasi (keaslian) biasanya terdiri dari membandingkan sifat (misalnya karakteristik spektral, perilaku kromatografi, aktivitas kimia, dll.) sampel uji dan sampel standar.

7. Pengujian untuk menentukan kandungan kuantitatif pengotor dan pengujian untuk menentukan batas kandungan pengotor dalam suatu sampel bertujuan untuk menggambarkan dengan benar kemurnian sampel. Persyaratan validasi metode penentuan kuantitatif pengotor berbeda dengan persyaratan validasi metode penentuan batas kandungan pengotor dalam suatu sampel.

8. Metode uji kuantitatif bertujuan untuk mengukur kandungan analit dalam sampel uji. Dalam Pedoman ini, kuantisasi mengacu pada pengukuran kuantitatif komponen utama suatu bahan farmasi. Parameter validasi serupa berlaku untuk penentuan kuantitatif zat aktif atau komponen lain dari produk obat. Parameter validasi kuantifikasi dapat digunakan dalam prosedur analitis lainnya (misalnya pengujian disolusi).

Tujuan dari prosedur analitis harus didefinisikan dengan jelas, karena hal ini menentukan pilihan karakteristik validasi yang harus dinilai selama validasi.

9. Karakteristik validasi prosedur analitis yang umum berikut ini harus dinilai:

a) akurasi (kebenaran);

b) presisi:

pengulangan;

presisi menengah (intralaboratorium);

c) kekhususan;

d) batas deteksi;

e) batas kuantitasi;

f) linearitas;

g) jangkauan penerapan (area analitis).

10. Karakteristik validasi yang paling penting untuk validasi berbagai jenis metode analisis diberikan dalam tabel.

Meja. Karakteristik validasi untuk validasi berbagai jenis metode analisis

________________
*Jika reproduktifitas ditentukan, penentuan presisi menengah tidak diperlukan.

** Kurangnya kekhususan suatu teknik analisis dapat diimbangi dengan penggunaan satu atau lebih teknik analisis tambahan.

*** Mungkin diperlukan dalam beberapa kasus (misalnya, ketika batas deteksi dan batas normalisasi untuk kandungan pengotor yang ditentukan sudah dekat).

Catatan. "-" - karakteristik tidak dievaluasi, "+" - karakteristik dievaluasi.


Daftar yang ditentukan harus dianggap sebagai daftar standar ketika memvalidasi metode analisis. Mungkin ada pengecualian yang memerlukan pembenaran terpisah oleh produsen produk obat. Karakteristik teknik analisis seperti stabilitas (kekokohan) tidak ditampilkan dalam tabel, tetapi harus dipertimbangkan pada tahap yang tepat dalam pengembangan teknik analisis.

Validasi ulang (revalidasi) mungkin diperlukan dalam kasus berikut (namun tidak terbatas pada):

mengubah skema sintesis suatu zat farmasi;

perubahan komposisi produk obat;

perubahan dalam metodologi analitis.

Validasi ulang tidak dilakukan jika pabrikan memberikan justifikasi yang sesuai. Ruang lingkup validasi ulang bergantung pada sifat perubahan yang dilakukan.

IV. Metodologi validasi metode analisis

1. Persyaratan umum metodologi validasi metode analisis

11. Bagian ini menguraikan karakteristik yang dipertimbangkan dalam validasi metode analisis dan memberikan beberapa pendekatan dan rekomendasi untuk menetapkan berbagai karakteristik validasi setiap metode analisis.

12. Dalam beberapa kasus (misalnya, ketika membuktikan spesifisitas), kombinasi beberapa teknik analisis dapat digunakan untuk menjamin mutu suatu bahan farmasi atau produk obat.

13. Semua data relevan yang dikumpulkan selama validasi dan rumus yang digunakan untuk menghitung karakteristik validasi harus disajikan dan dianalisis.

14. Dibolehkan menggunakan pendekatan selain yang ditetapkan dalam Pedoman ini. Pemilihan prosedur dan protokol validasi menjadi tanggung jawab pemohon. Dalam hal ini, tujuan utama validasi suatu metode analisis adalah untuk memastikan kesesuaian metode tersebut dengan tujuan yang dimaksudkan. Karena kompleksitasnya, pendekatan terhadap metode analisis produk biologi dan bioteknologi mungkin berbeda dari yang dijelaskan dalam Panduan ini.

15. Selama studi validasi, bahan referensi dengan karakteristik yang diketahui dan terdokumentasi harus digunakan. Tingkat kemurnian sampel standar yang diperlukan tergantung pada tujuan yang dimaksudkan.

16. Berbagai karakteristik validasi dibahas dalam subbagian terpisah pada bagian ini. Struktur bagian ini mencerminkan kemajuan proses pengembangan dan evaluasi metodologi analisis.

17. Pekerjaan eksperimental harus dirancang sedemikian rupa sehingga karakteristik validasi yang relevan dipelajari secara bersamaan, memperoleh data yang dapat diandalkan mengenai kemampuan prosedur analitis (misalnya, spesifisitas, linearitas, jangkauan penerapan, akurasi dan presisi).

2. Kekhususan

18. Studi spesifisitas harus dilakukan selama validasi uji identifikasi, pengotor dan kuantisasi. Prosedur untuk memastikan kekhususan bergantung pada tujuan prosedur analitis.

19. Metode untuk memastikan kekhususan bergantung pada tugas yang ingin diselesaikan oleh teknik analisis. Tidak selalu mungkin untuk memastikan bahwa suatu prosedur analisis bersifat spesifik untuk suatu analit tertentu (selektivitas lengkap). Dalam hal ini, disarankan untuk menggunakan kombinasi 2 atau lebih teknik analisis.

Kurangnya kekhususan suatu teknik analisis dapat diimbangi dengan penggunaan satu atau lebih teknik analisis tambahan.

20. Kekhususan untuk berbagai jenis pengujian berarti sebagai berikut:

a) saat menguji identifikasi - konfirmasi bahwa metode tersebut memungkinkan identifikasi zat yang ditentukan;

b) saat menguji pengotor, konfirmasi bahwa prosedur tersebut dapat mengidentifikasi pengotor dalam sampel dengan benar (misalnya, pengujian senyawa terkait, logam berat, kandungan sisa pelarut, dll.);

c) dalam tes kuantitatif - konfirmasi bahwa metode tersebut memungkinkan seseorang untuk menentukan kandungan atau aktivitas zat yang ditentukan dalam sampel.

Identifikasi

21. Uji identifikasi yang memuaskan harus mampu membedakan senyawa-senyawa yang secara struktural berkerabat dekat yang mungkin ada dalam sampel. Selektivitas suatu prosedur analitik dapat ditunjukkan dengan memperoleh hasil positif (mungkin dengan membandingkan dengan standar acuan yang diketahui) untuk sampel yang mengandung analit dan hasil negatif untuk sampel yang tidak mengandung analit.

22. Untuk memastikan tidak adanya hasil positif palsu, dapat dilakukan uji identifikasi terhadap zat yang mempunyai struktur serupa atau zat yang menyertai zat yang ditentukan.

23. Pemilihan zat yang berpotensi mengganggu harus dapat dibenarkan.

Kuantifikasi dan pengujian pengotor

24. Ketika menunjukkan kekhususan suatu prosedur analisis dengan menggunakan metode pemisahan kromatografi, kromatogram yang representatif harus disediakan, dengan masing-masing komponen dapat diidentifikasi dengan tepat. Pendekatan serupa harus dilakukan pada teknik berbasis pemisahan lainnya.

25. Pemisahan kritis dalam kromatografi harus dipelajari pada tingkat yang sesuai. Dalam kasus pemisahan kritis, nilai resolusi dari 2 komponen eluting terdekat harus ditetapkan.

26. Saat menggunakan metode kuantisasi nonspesifik, teknik analisis tambahan harus digunakan dan kekhususan seluruh rangkaian teknik harus dikonfirmasi. Misalnya, jika penentuan kuantitatif dilakukan dengan menggunakan metode titrimetri ketika melepaskan suatu zat farmasi, maka dapat dilengkapi dengan uji pengotor yang sesuai.

27. Pendekatannya serupa untuk pengujian kuantisasi dan pengotor.

Ketersediaan sampel pengotor

28. Jika sampel pengotor tersedia, penentuan kekhususan prosedur analisis adalah sebagai berikut:

a) selama penentuan kuantitatif, perlu untuk memastikan selektivitas penentuan suatu zat dengan adanya pengotor dan (atau) komponen lain dari sampel. Dalam prakteknya, hal ini dilakukan dengan menambahkan pengotor dan (atau) eksipien dalam jumlah yang sesuai ke dalam sampel (bahan farmasi atau produk obat) dan jika terdapat bukti bahwa hal tersebut tidak mempengaruhi hasil penentuan kuantitatif zat aktif;

b) dalam pengujian pengotor, spesifisitas dapat ditentukan dengan menambahkan pengotor ke bahan farmasi atau produk obat dalam jumlah tertentu dan memberikan bukti pemisahan pengotor tersebut satu sama lain dan (atau) dari komponen sampel lainnya.

Tidak ada sampel pengotor

29. Jika sampel standar pengotor atau produk degradasi tidak tersedia, spesifisitas dapat dipastikan dengan membandingkan hasil pengujian sampel yang mengandung pengotor atau produk degradasi dengan hasil prosedur lain yang divalidasi (misalnya farmakope atau prosedur analitis tervalidasi lainnya (independen)) prosedur). Jika diperlukan, standar referensi pengotor harus mencakup sampel yang disimpan dalam kondisi tekanan tertentu (cahaya, panas, kelembaban, hidrolisis asam (basa) dan oksidasi).

30. Dalam hal penentuan kuantitatif, perlu membandingkan 2 hasil.

31. Dalam hal pengujian pengotor, profil pengotor harus dibandingkan.

32. Untuk membuktikan bahwa puncak analit ditentukan hanya oleh satu komponen, disarankan untuk melakukan studi tentang kemurnian puncak (misalnya, penggunaan deteksi susunan dioda, spektrometri massa).

3. Linearitas

33. Hubungan linier harus dinilai pada seluruh penerapan teknik analisis. Hal ini dapat dikonfirmasikan secara langsung pada bahan farmasi (dengan mengencerkan larutan standar utama) dan (atau) pada sampel individu campuran komponen obat buatan (model) dengan menggunakan metode yang diusulkan. Aspek terakhir dapat dipelajari selama penentuan jangkauan penerapan (area analitis) teknik tersebut.

34. Linearitas dinilai secara visual dengan memplot sinyal analitik sebagai fungsi konsentrasi atau jumlah analit. Jika terdapat hubungan linier yang jelas, maka hasil yang diperoleh harus diolah dengan menggunakan metode statistik yang sesuai (misalnya dengan menghitung garis regresi menggunakan metode kuadrat terkecil). Untuk mendapatkan linearitas antara hasil pengujian dan konsentrasi sampel, transformasi matematis dari hasil pengujian mungkin diperlukan sebelum analisis regresi. Hasil analisis garis regresi dapat digunakan untuk memperkirakan derajat linearitas secara matematis.

35. Jika tidak ada linearitas, data uji harus ditransformasikan secara matematis sebelum melakukan analisis regresi.

36. Untuk memastikan linearitas, koefisien korelasi atau koefisien determinasi, suku potong regresi linier, kemiringan garis regresi dan jumlah sisa simpangan kuadrat harus ditentukan dan disajikan, serta grafik dengan semua data eksperimen .

37. Jika linearitas tidak diamati dengan segala jenis transformasi matematis (misalnya, selama validasi metode imunoanalisis), sinyal analitik harus dijelaskan menggunakan fungsi konsentrasi (jumlah) analit dalam sampel yang sesuai.

V. Rentang penerapan (area analitis)

39. Cakupan penerapan suatu teknik analisis bergantung pada tujuannya dan ditentukan dengan mempelajari linearitas. Dalam jangkauan penerapannya, prosedur harus memberikan linearitas, akurasi dan presisi yang diperlukan.

40. Rentang penerapan (bidang analitis) metode analisis berikut ini harus dianggap sebagai batas minimum yang dapat diterima:

a) untuk penentuan kuantitatif zat aktif dalam bahan farmasi atau produk obat - dari konsentrasi (kandungan) 80 persen hingga konsentrasi (kandungan) 120 persen dari konsentrasi nominal (kandungan);

b) untuk keseragaman dosis - dari konsentrasi (kandungan) 70 persen hingga konsentrasi (kandungan) 130 persen, kecuali jika kisaran yang lebih luas dibenarkan untuk produk obat tergantung pada bentuk sediaan (misalnya, inhaler dosis terukur);

c) untuk pengujian disolusi - ±20 persen (mutlak) dari rentang penerapan nominal. Misalnya, jika spesifikasi untuk obat pelepasan termodifikasi mencakup rentang dari 20 persen dalam satu jam pertama hingga 90 persen dari kandungan yang dinyatakan dalam 24 jam, rentang penerapan yang divalidasi harus antara 0 hingga 110 persen dari kandungan yang dinyatakan;

d) untuk menentukan pengotor - dari batas deteksi pengotor hingga nilai 120 persen yang ditentukan dalam spesifikasi;

(e) Untuk pengotor yang sangat kuat atau mempunyai efek farmakologis yang toksik atau tidak diharapkan, batas deteksi dan batas kuantisasi harus sepadan dengan tingkat di mana pengotor tersebut harus dikontrol. Untuk memvalidasi prosedur uji pengotor yang digunakan selama pengembangan, domain analitis mungkin perlu diatur mendekati batas yang diharapkan (mungkin);

f) Jika penetapan kadar dan kemurnian dipelajari secara bersamaan dalam satu pengujian dan hanya standar 100% yang digunakan, hubungannya harus linier pada seluruh rentang penerapan prosedur analitis mulai dari ambang batas pelaporan untuk pengotor (sesuai dengan aturan untuk studi pengotor dalam produk obat dan penetapan persyaratannya dalam spesifikasi yang disetujui oleh Komisi Ekonomi Eurasia) hingga kandungan 120 persen yang ditentukan dalam spesifikasi untuk penentuan kuantitatif.

VI. Benar

41. Keakuratan harus ditetapkan untuk seluruh penerapan prosedur analitis.

1. Penentuan kuantitatif bahan aktif farmasi

Bahan farmasi

42. Beberapa metode untuk menilai kebenaran dapat digunakan:

penerapan prosedur analitik pada analit yang kemurniannya diketahui (misalnya, pada bahan standar);

perbandingan hasil analisis yang diperoleh dengan menggunakan prosedur analisis yang telah tervalidasi dan hasil yang diperoleh dengan menggunakan prosedur yang diketahui dan/atau prosedur independen.

Kesimpulan tentang akurasi dapat diambil setelah menetapkan presisi, linearitas, dan spesifisitas.

Obat

43. Beberapa metode untuk menilai kebenaran dapat digunakan:

penerapan teknik analisis pada campuran komponen obat (model) buatan, yang telah ditambahkan analit dalam jumlah yang telah diketahui sebelumnya;

Dengan tidak adanya sampel dari seluruh komponen produk obat, dimungkinkan untuk menambahkan jumlah bahan farmasi yang telah diketahui sebelumnya ke dalam produk obat atau membandingkan hasil yang diperoleh dengan menggunakan metode lain, yang keakuratannya diketahui, dan (atau) sebuah metode independen.

Kesimpulan tentang akurasi dapat diambil setelah menentukan presisi, linearitas, dan spesifisitas.

2. Penentuan pengotor secara kuantitatif

44. Akurasi ditentukan dengan menggunakan sampel (bahan farmasi dan produk obat) yang telah ditambahkan pengotor dalam jumlah yang diketahui.

45. Jika tidak ada sampel pengotor dan (atau) produk degradasi yang dapat diidentifikasi, perbandingan hasil dengan hasil yang diperoleh dengan menggunakan teknik independen dapat diterima. Penggunaan sinyal analitik dari zat aktif diperbolehkan.

46. ​​​​Metode khusus untuk menyatakan kandungan pengotor individu atau jumlahnya harus ditentukan (misalnya, sebagai persentase berat atau sebagai persentase luas puncak, tetapi dalam semua kasus relatif terhadap analit utama).

47. Akurasi dinilai untuk setidaknya 9 penentuan pada 3 konsentrasi berbeda yang mencakup seluruh rentang aplikasi (yaitu 3 konsentrasi dan 3 ulangan untuk setiap konsentrasi). Definisi harus mencakup seluruh tahapan metodologi.

48. Akurasi dinyatakan dengan persentase keterbukaan berdasarkan hasil penentuan kuantitatif suatu zat yang ditambahkan dalam jumlah yang diketahui ke dalam sampel yang dianalisis, atau selisih antara nilai rata-rata yang diperoleh dan nilai (referensi) yang sebenarnya, dengan mempertimbangkan interval kepercayaan yang sesuai.

VII. Presisi

49. Validasi uji kuantisasi dan pengotor melibatkan penentuan presisi.

50. Presisi ditetapkan pada 3 tingkat: pengulangan, presisi menengah, dan reproduktifitas. Presisi harus ditetapkan dengan menggunakan sampel yang homogen dan otentik. Jika tidak mungkin memperoleh sampel yang homogen, diperbolehkan untuk menentukan presisi dengan menggunakan sampel (model) yang dibuat secara artifisial atau larutan sampel. Ketepatan suatu teknik analisis biasanya dinyatakan dalam varians, deviasi standar, atau koefisien variasi dari serangkaian pengukuran.

VIII. Pengulangan

51. Keterulangan ditentukan dengan melakukan paling sedikit 9 ​​kali penentuan konsentrasi dalam rentang penerapan prosedur analitik (3 konsentrasi dan 3 kali ulangan untuk setiap konsentrasi), atau paling sedikit 6 kali penentuan konsentrasi untuk sampel dengan kandungan analit 100%.

IX. Presisi menengah (di laboratorium).

52. Sejauh mana ketelitian menengah dapat dicapai tergantung pada kondisi penggunaan teknik analisis. Pemohon harus menetapkan pengaruh faktor acak terhadap ketepatan prosedur analitis. Faktor-faktor khas yang dipelajari (variabel) adalah hari yang berbeda, analis, peralatan, dll. Pengaruh-pengaruh ini tidak perlu dipelajari secara terpisah. Saat mempelajari pengaruh berbagai faktor, sebaiknya menggunakan desain eksperimen.

X. Reproduksibilitas

53. Reproduksibilitas mencirikan presisi dalam eksperimen antar laboratorium. Reproduksibilitas harus ditentukan dalam hal standarisasi prosedur analitis (misalnya, ketika prosedur tersebut dimasukkan dalam Farmakope Persatuan atau dalam farmakope Negara-negara Anggota). Pencantuman data reproduktifitas dalam berkas pendaftaran tidak diperlukan.

XI. Penyajian data

54. Untuk setiap jenis presisi, perlu ditunjukkan simpangan baku, simpangan baku relatif (koefisien variasi) dan selang kepercayaan.

XII. Batas deteksi

55. Berbagai pendekatan untuk menentukan batas deteksi dapat dilakukan, bergantung pada apakah teknik tersebut bersifat instrumental atau non-instrumental. Pendekatan lain juga dapat digunakan.

XIII. Penilaian visual

56. Penilaian visual dapat digunakan baik untuk teknik non-instrumental maupun instrumental. Batas deteksi ditentukan dengan menganalisis sampel dengan konsentrasi analit yang diketahui dan menentukan kandungan minimumnya yang dapat dideteksi secara andal.

XIV. Estimasi batas deteksi berdasarkan rasio signal-to-noise

57. Pendekatan ini hanya dapat diterapkan pada teknik analisis yang menggunakan baseline noise (kebisingan dasar) yang diamati.

58. Penentuan rasio signal-to-noise dilakukan dengan membandingkan sinyal yang diperoleh dari sampel dengan konsentrasi rendah yang diketahui dengan sinyal yang diperoleh dari sampel kosong, dan menetapkan konsentrasi minimum di mana analit dapat dideteksi dengan andal. Untuk menilai batas deteksi, rasio sinyal terhadap kebisingan 3:1 hingga 2:1 dianggap dapat diterima.

XV. Estimasi batas deteksi dari standar deviasi sinyal analitik dan kemiringan kurva kalibrasi

59. Batas deteksi (LOD) dapat dinyatakan sebagai berikut:

Di mana:

60. Nilai k dihitung dari kurva kalibrasi analit. Estimasi s dapat dilakukan dengan beberapa cara:

b) menurut kurva kalibrasi. Kurva kalibrasi yang dihasilkan, yang dibuat untuk sampel dengan kandungan analit mendekati batas deteksi, harus dianalisis. Simpangan baku sisa garis regresi atau simpangan baku titik potong dengan sumbu ordinat (simbol baku bebas suku bebas regresi linier) dapat digunakan sebagai simpangan baku.

XVI. Penyajian data

61. Perlu disebutkan batas deteksi dan cara penentuannya. Jika penentuan batas deteksi didasarkan pada penilaian visual atau penilaian rasio signal-to-noise, penyajian kromatogram yang sesuai dianggap cukup untuk membenarkan hal tersebut.

62. Jika nilai batas deteksi diperoleh dengan perhitungan atau ekstrapolasi, perkiraan tersebut harus dikonfirmasi dengan pengujian independen terhadap sampel yang mengandung analit dalam jumlah yang cukup pada atau mendekati batas deteksi.

XVII. Batas kuantitasi

63. Batas kuantisasi adalah karakteristik validasi yang diperlukan dari metode yang digunakan untuk menentukan rendahnya kadar zat dalam suatu sampel, khususnya untuk penentuan pengotor dan (atau) produk degradasi.

64. Beberapa pendekatan untuk menentukan batas kuantisasi dapat dilakukan, tergantung pada apakah teknik tersebut bersifat instrumental atau non-instrumental. Pendekatan lain dapat digunakan.

XVIII. Penilaian visual

65. Penilaian visual dapat digunakan baik untuk teknik non-instrumental maupun instrumental.

66. Batas kuantisasi biasanya ditentukan dengan menganalisis sampel dengan konsentrasi analit yang diketahui dan menilai konsentrasi minimum di mana analit dapat dikuantifikasi dengan akurasi dan presisi yang dapat diterima.

XIX. Estimasi batas kuantifikasi dari rasio signal-to-noise

67. Pendekatan ini hanya berlaku untuk metode pengukuran dimana kebisingan dasar teramati.

68. Penentuan rasio signal-to-noise dilakukan dengan membandingkan sinyal terukur yang diperoleh dari sampel dengan konsentrasi analit yang diketahui rendah dengan sinyal yang diperoleh dari sampel kosong, dan menetapkan konsentrasi minimum di mana analit dapat diukur secara andal. . Rasio signal-to-noise yang umum adalah 10:1.

XX. Estimasi batas kuantisasi dari standar deviasi sinyal dan kemiringan kurva kalibrasi

69. Batas kuantitasi (LOQ) dapat dinyatakan sebagai berikut:

Di mana:

s adalah deviasi standar dari sinyal analitik;

k adalah garis singgung sudut kemiringan kurva kalibrasi.

70. Nilai k dihitung dari kurva kalibrasi analit. Estimasi s dapat dilakukan dengan beberapa cara:

a) menurut simpangan baku sampel blanko. Besarnya sinyal analitik untuk sejumlah sampel kosong diukur, dan deviasi standar nilainya dihitung;

b) menurut kurva kalibrasi. Kurva kalibrasi yang dihasilkan, yang dibuat untuk sampel dengan kandungan analit mendekati batas kuantisasi, harus dianalisis. Simpangan baku sisa garis regresi atau simpangan baku titik potong dengan sumbu ordinat (simbol simpangan baku suku bebas regresi linier) dapat digunakan sebagai simpangan baku.

XXI. Penyajian data

71. Perlu disebutkan batas kuantitasi dan cara penentuannya.

72. Batas kuantisasi selanjutnya harus dipastikan dengan menganalisis sejumlah sampel yang mengandung analit pada atau mendekati batas kuantisasi dalam jumlah yang cukup.

73. Pendekatan lain selain yang disebutkan di atas mungkin dapat diterima.

XXII. Stabilitas (kekokohan)

74. Kajian kestabilan (robustness) harus dilakukan pada tahap pengembangan; ruang lingkup penelitian tergantung pada teknik analisis yang dipertimbangkan. Keandalan analisis perlu ditunjukkan dengan variasi yang disengaja dalam parameter (kondisi) metode.

75. Jika hasil pengukuran bergantung pada perubahan kondisi penggunaan prosedur analitis, kepatuhan terhadap kondisi tersebut harus dikontrol secara ketat atau tindakan pencegahan harus ditetapkan selama pengujian.

76. Untuk memastikan bahwa validitas suatu prosedur analitis tetap terjaga selama penggunaannya, salah satu konsekuensi dari studi ketahanan harus berupa penetapan serangkaian parameter kesesuaian sistem (misalnya, uji resolusi).

77. Variasi parameter yang umum adalah:

stabilitas solusi yang digunakan dalam teknik analisis;

waktu ekstraksi.

Parameter variasi kromatografi cair adalah:

perubahan pH fase gerak;

perubahan komposisi fase gerak;

pembicara yang berbeda (seri dan pemasok berbeda);

suhu;

kecepatan fase gerak (laju aliran).

Parameter variasi kromatografi gas adalah:

berbagai pembicara (seri dan pemasok berbeda);

suhu;

kecepatan gas pembawa.

XXIII. Penilaian Kesesuaian Sistem

78. Menilai kesesuaian sistem merupakan bagian integral dari banyak teknik analisis. Pengujian ini didasarkan pada konsep bahwa peralatan, elektronik, operasi analitis, dan sampel yang dianalisis merupakan suatu sistem yang lengkap dan harus dievaluasi seperti itu. Kriteria kesesuaian sistem harus ditetapkan untuk prosedur tertentu dan bergantung pada jenis prosedur analitis yang divalidasi. Informasi lebih lanjut dapat diperoleh dari Farmakope Persatuan atau dari Farmakope Negara Anggota.



Teks dokumen elektronik
disiapkan oleh Kodeks JSC dan diverifikasi terhadap:
situs resmi
Uni Ekonomi Eurasia
www.eaeunion.org, 20/07/2018

Batas kuantitasi

"...Batas kuantisasi (LOQ) (dalam definisi analitik): konsentrasi atau analit terendah dalam sampel analit yang dapat diukur dengan tingkat presisi dan akurasi yang dapat diterima, seperti yang ditunjukkan oleh pengujian kolaboratif laboratorium atau validasi metode lain yang sesuai. .."

Sumber:

"PRODUK MAKANAN. METODE ANALISIS DETEKSI ORGANISME rekayasa genetika DAN PRODUK YANG DIPEROLEH DARINYA. PERSYARATAN UMUM DAN DEFINISI. GOST R 53214-2008 (ISO 24276:2006)"

(disetujui dengan Perintah Rostekhregulirovaniya tanggal 25 Desember 2008 N 708-st)

Terminologi resmi. Akademik.ru. 2012.

Lihat apa itu “Batas Kuantifikasi” di kamus lain:

batas kuantitasi- 3,7 batas kuantifikasi (LOQ): Peningkatan sepuluh kali lipat dalam standar deviasi massa sampel. Catatan Nilai LOQ digunakan sebagai nilai ambang batas, yang diatasnya adalah massa... ...

batas pengulangan- 3.7 batas pengulangan: Perbedaan mutlak antara hasil nilai maksimum dan minimum dari jumlah pengukuran yang ditentukan yang dilakukan dalam kondisi pengulangan menurut GOST R ISO 5725 1. Sumber ... Buku referensi kamus istilah dokumentasi normatif dan teknis

batas reproduksibilitas- 2.9 batas reproduktifitas: Nilai di bawahnya, dengan probabilitas 95%, terletak pada nilai absolut selisih antara dua hasil pengujian yang diperoleh dalam kondisi reproduktifitas. Sumber … Buku referensi kamus istilah dokumentasi normatif dan teknis

batas pengulangan (konvergensi)- 3.11 batas pengulangan: Suatu nilai yang, dengan probabilitas kepercayaan 95%, tidak terlampaui oleh nilai absolut selisih antara hasil dua pengukuran (atau pengujian) yang diperoleh dalam kondisi pengulangan... Buku referensi kamus istilah dokumentasi normatif dan teknis

Batas presisi intralaboratorium- 3.11 Batas presisi intra-laboratorium: Perbedaan absolut yang diperbolehkan untuk probabilitas P yang diterima antara dua hasil analisis yang diperoleh dalam kondisi presisi intra-laboratorium. Sumber … Buku referensi kamus istilah dokumentasi normatif dan teknis

batas reproduksibilitas R- 2.19.2 Batas reproduktifitas R : Nilai absolut selisih dua hasil pengujian pada kondisi reproduktifitas (lihat 2.19.1) dengan tingkat kepercayaan 95%. 2.19.1, 2.19.2 (Edisi diubah, judul= Perubahan No. 1, IUS 12 2002).… … Buku referensi kamus istilah dokumentasi normatif dan teknis

MI 2881-2004: Rekomendasi. GSI. Metode analisis kimia kuantitatif. Prosedur untuk memeriksa penerimaan hasil analisis- Terminologi MI 2881 2004 : Rekomendasi. GSI. Metode analisis kimia kuantitatif. Prosedur untuk memeriksa penerimaan hasil analisis: 3.17 perbedaan kritis: Perbedaan absolut yang diperbolehkan untuk probabilitas yang diterima sebesar 95% antara ... ... Buku referensi kamus istilah dokumentasi normatif dan teknis

GOST R 50779.11-2000: Metode statistik. Manajemen kualitas statistik. Istilah dan Definisi- Terminologi GOST R 50779.11 2000: Metode statistik. Manajemen kualitas statistik. Istilah dan definisi dokumen asli : 3.4.3 (atas dan bawah) batas kendali Batas pada peta kendali, yang diatasnya merupakan batas atas, ... ... Buku referensi kamus istilah dokumentasi normatif dan teknis

GOST R 50779.10-2000: Metode statistik. Probabilitas dan statistik dasar. Istilah dan Definisi- Terminologi GOST R 50779.10 2000: Metode statistik. Probabilitas dan statistik dasar. Istilah dan definisi dokumen asli: 2.3. Populasi (umum) Himpunan semua unit yang dipertimbangkan. Catatan Untuk variabel acak... ... Buku referensi kamus istilah dokumentasi normatif dan teknis

RMG 61-2003: Sistem negara untuk memastikan keseragaman pengukuran. Indikator keakuratan, kebenaran, ketepatan metode analisis kimia kuantitatif. Metode penilaian- Terminologi RMG 61 2003: Sistem negara untuk menjamin keseragaman pengukuran. Indikator keakuratan, kebenaran, ketepatan metode analisis kimia kuantitatif. Metode penilaian: 3.12 presisi intra-laboratorium: Presisi ... Buku referensi kamus istilah dokumentasi normatif dan teknis

Setiap metode instrumental dicirikan oleh tingkat kebisingan tertentu yang terkait dengan proses pengukuran secara spesifik. Oleh karena itu, selalu ada batas kandungan yang di bawahnya suatu zat tidak dapat dideteksi sama sekali.

Batas deteksi C min , P – konten terendah di mana metode ini dapat mendeteksi keberadaan komponen dengan probabilitas keyakinan tertentu.

Batas deteksi juga dapat diatur oleh sinyal analitik minimum y min, yang dapat dibedakan dengan pasti dari sinyal eksperimen kontrol - y latar belakang.

Metode statistik yang menggunakan pertidaksamaan Chebyshev telah membuktikan bahwa batas deteksi dapat ditentukan secara kuantitatif dengan menggunakan ekspresi

Dimana latar belakang adalah standar deviasi dari sinyal latar belakang analitis; S - koefisien sensitivitas (kadang-kadang disebut hanya "sensitivitas"), yang mencirikan respons sinyal analitik terhadap konten komponen. Koefisien sensitivitas adalah nilai turunan pertama fungsi kalibrasi untuk penentuan konsentrasi tertentu. Untuk grafik kalibrasi garis lurus, ini adalah garis singgung sudut kemiringan:

(Perhatian: jangan bingung faktor sensitivitasS dengan deviasi standarS!)

Ada cara lain untuk menghitung batas deteksi, namun persamaan ini adalah yang paling sering digunakan.

Dalam analisis kimia kuantitatif, kisaran kandungan atau konsentrasi tertentu biasanya diberikan. Artinya kisaran nilai kandungan (konsentrasi) yang ditentukan yang disediakan oleh teknik ini dan dibatasi oleh batas bawah dan atas dari konsentrasi yang ditentukan.

Analis sering kali tertarik pada batas bawah konsentrasi yang ditentukan Dengan N atau konten M N komponen ditentukan menggunakan metode ini. Melampaui batas bawah isi yang ditentukan biasanya mengambil jumlah atau konsentrasi minimum yang dapat ditentukan dengan standar deviasi relatif

. .

Contoh

Konsentrasi massa besi dalam larutan ditentukan dengan metode spektrofotometri, yaitu mengukur kerapatan optik larutan yang diwarnai sebagai hasil interaksi ion Fe 3+ dengan asam sulfosalisilat. Untuk membangun ketergantungan kalibrasi, kerapatan optik larutan dengan peningkatan (ditentukan) konsentrasi besi yang diolah dengan asam sulfosalisilat diukur.

Massa jenis optik larutan referensi (percobaan kontrol untuk reagen, yaitu tanpa penambahan besi, (latar belakang) adalah 0,002; 0,000; 0,008; 0,006; 0,003.

Menghitung batas deteksi besi.

Larutan

1) Dari hasil perhitungan dengan metode kuadrat terkecil (lihat contoh tugas tes No. 5), diperoleh nilai untuk membuat grafik kalibrasi.

Nilai yang dihitung untuk membuat grafik kalibrasi

2) Kami menghitung koefisien sensitivitas, yaitu koefisien sudut ketergantungan kalibrasi (S) sesuai dengan data tabel.

3) Hitung deviasi standar sinyal latar belakang, apa 0,0032 satuan kerapatan optik.

4) Batas deteksinya adalah mg/cm3

Tugas tes No.6

Tentukan batas deteksi zat besi dalam air.

Data awal : nilai kerapatan optik latar belakang (larutan referensi) saat membuat grafik kalibrasi untuk penentuan besi adalah 0,003; 0,001; 0,007; 0,005; 0,006; 0,003; 0,001; 0,005. Nilai kerapatan optik yang sesuai dengan konsentrasi besi dalam larutan disajikan pada tabel tugas kendali No.5.

Hitung batas deteksi besi dalam mg/cm 3 menggunakan koefisien sensitivitas S yang dihitung berdasarkan data yang diperoleh untuk membuat grafik kalibrasi menggunakan metode kuadrat terkecil saat melakukan tugas pengendalian No.5;

KEMENTERIAN KESEHATAN FEDERASI RUSIA

PASAL FARMAKOPOE UMUM

Validasi metode analisis OFS.1.1.0012.15

Diperkenalkan untuk pertama kalinya

Validasi suatu metode analisis merupakan bukti eksperimental bahwa metode tersebut cocok untuk memecahkan masalah yang dimaksud.

Monograf farmakope umum ini mengatur karakteristik metode analisis yang ditentukan untuk tujuan validasinya, dan kriteria yang sesuai untuk kesesuaian metode yang divalidasi yang dimaksudkan untuk pengendalian mutu produk obat: bahan farmasi dan produk obat.

Metode penentuan kuantitatif harus divalidasi, termasuk metode penentuan pengotor dan metode penentuan batas kandungan. Metode autentikasi divalidasi bila diperlukan untuk mengonfirmasi kekhususannya.

Selama validasi, metode analisis dievaluasi berdasarkan karakteristik yang tercantum di bawah ini, dipilih dengan mempertimbangkan rekomendasi standar yang diberikan dalam tabel:

• kekhususan;
• batas deteksi;
• batas kuantitasi;
• area analitis (rentang);
• linearitas;
• kebenaran (kebenaran);
• presisi;
• ketahanan.

Tabel 1 - Karakteristik metode yang ditentukan selama validasi

*) dapat ditentukan bila diperlukan;

**) Kurangnya kekhususan suatu teknik analisis dapat diimbangi dengan penggunaan teknik analisis yang lain.

Validasi ulang (re-validation) metode dilakukan apabila:

• teknologi untuk memperoleh objek analisis;
• komposisi produk obat (objek analisis);
• metode analisis yang disetujui sebelumnya.

1. Kekhususan

Spesifisitas adalah kemampuan suatu teknik analisis untuk mengevaluasi analit secara jelas dengan adanya komponen yang menyertainya.

Bukti kekhususan prosedur yang divalidasi biasanya didasarkan pada pertimbangan data yang diperoleh dari analisis campuran model dengan komposisi yang diketahui.

Kekhususan metode yang telah divalidasi juga dapat dibuktikan dengan pengolahan statistik yang sesuai dari hasil analisis objek nyata yang dilakukan dengan menggunakan metode tersebut dan, secara paralel, dengan menggunakan metode lain yang jelas-jelas spesifik (metode yang kekhususannya telah terbukti).

1.1 Untuk metode uji keaslian

Metode yang divalidasi (atau serangkaian metode) harus memberikan informasi yang dapat dipercaya tentang keberadaan zat aktif tertentu dalam suatu zat atau bentuk sediaan jika mengandung komponen yang ditentukan dalam resep, yang harus dikonfirmasi secara eksperimental.

Keaslian zat aktif dalam suatu bahan farmasi atau produk obat ditentukan melalui perbandingan dengan sampel standar atau berdasarkan sifat fisikokimia atau kimia yang bukan merupakan ciri komponen lain.

1.2 Untuk prosedur pengujian kuantisasi dan pengotor

Metode pengujian kuantisasi dan pengotor yang divalidasi tunduk pada pendekatan yang sama: kekhususannya untuk analit harus dinilai, yaitu, harus diverifikasi secara eksperimental bahwa keberadaan komponen yang menyertainya tidak terlalu mempengaruhi hasil analisis.

Kekhususan metode yang divalidasi dapat dinilai baik dengan menganalisis campuran model dengan komposisi yang diketahui mengandung analit, dan dengan membandingkan hasil analisis objek nyata yang diperoleh secara bersamaan menggunakan metode yang telah divalidasi dan metode lain yang jelas spesifik. Hasil percobaan yang relevan harus diproses secara statistik.

Kurangnya spesifisitas tes dapat diimbangi dengan tes tambahan lainnya.

Saat memvalidasi metode, jika sesuai, sampel obat yang telah terkena kondisi ekstrem (cahaya, suhu, kelembapan) atau yang dimodifikasi secara kimia dengan metode apa pun yang sesuai dapat digunakan untuk mengakumulasi pengotor.

Untuk teknik kromatografi, resolusi antara dua zat yang paling sulit dielusi pada konsentrasi yang sesuai ditunjukkan.

1. BATAS DETEKSI

Batas deteksi adalah jumlah (konsentrasi) analit terkecil dalam sampel yang dapat dideteksi (atau diperkirakan) menggunakan metode yang divalidasi.

Batas deteksi dalam kasus yang tercantum dalam tabel biasanya dinyatakan sebagai konsentrasi analit (dalam % relatif atau bagian per juta - ppm).

Tergantung pada jenis tekniknya (visual atau instrumental), metode berbeda digunakan untuk menentukan batas deteksi.

2.1 Untuk metode dengan penilaian visual terhadap hasil analisis

Uji sampel dengan berbagai kuantitas (konsentrasi) analit yang diketahui dan tetapkan nilai minimum agar hasil analisis dapat dinilai secara visual. Nilai ini merupakan perkiraan batas deteksi.

2.2 Untuk metode dengan penilaian instrumental terhadap hasil analisis

2.2.1 Berdasarkan rasio signal-to-noise

Pendekatan ini dapat diterapkan pada metode yang mengamati kebisingan dasar. Besarnya sinyal yang diperoleh untuk eksperimen kontrol dan sampel dengan konsentrasi analit rendah dibandingkan. Tetapkan jumlah minimum (konsentrasi) analit dalam sampel di mana rasio sinyal analitik terhadap tingkat kebisingan sama dengan 3.

Nilai yang ditemukan merupakan perkiraan batas deteksi.

2.2.2 Berdasarkan nilai simpangan baku sinyal dan kemiringan grafik kalibrasi

Batas deteksi (DL) dicari dengan menggunakan persamaan:

PO = 3,3 · S/B,

Di mana S

B– koefisien sensitivitas, yaitu rasio sinyal analitik dengan nilai yang ditentukan (kemiringan kurva kalibrasi).

S Dan B

S S a suku bebas persamaan grafik ini. Nilai batas deteksi yang diperoleh, bila perlu, dapat dipastikan dengan percobaan langsung pada jumlah (konsentrasi) analit yang mendekati nilai batas deteksi yang ditemukan.

Secara umum, jika terdapat bukti bahwa suatu prosedur cocok untuk mendeteksi suatu zat secara andal pada konsentrasi di atas dan di bawah batas spesifikasinya, maka tidak perlu menentukan batas deteksi sebenarnya untuk prosedur tersebut.

1. BATAS KUANTIFIKASI

Batas kuantisasi adalah jumlah (konsentrasi) terkecil suatu zat dalam suatu sampel yang dapat diukur menggunakan prosedur yang telah divalidasi dengan akurasi yang diperlukan dan presisi dalam laboratorium (menengah).

Batas kuantisasi merupakan karakteristik validasi yang diperlukan dari metode yang digunakan untuk menilai sejumlah kecil (konsentrasi) zat dalam sampel dan, khususnya, untuk menilai kandungan pengotor.

Tergantung pada jenis tekniknya, metode berikut digunakan untuk mencari batas kuantisasi.

3.1 Untuk metode dengan penilaian visual terhadap hasil analisis

Uji sampel dengan berbagai jumlah (konsentrasi) analit yang diketahui dan tetapkan nilai minimum di mana hasil analisis dapat diperoleh secara visual dengan akurasi yang diperlukan dan presisi intra-laboratorium (menengah).

3.2 Untuk metode dengan penilaian instrumental terhadap hasil analisis

3.2.1 Berdasarkan rasio signal-to-noise

Tetapkan konsentrasi minimum analit dalam sampel di mana rasio sinyal analitik terhadap tingkat kebisingan adalah sekitar 10:1.

3.2.2 Berdasarkan standar deviasi sinyal dan kemiringan grafik kalibrasi

Batas kuantisasi (LOQ) dihitung menggunakan persamaan:

PKO = 10 · S/B,

Di mana S– deviasi standar dari sinyal analitis;

B– koefisien sensitivitas, yaitu rasio sinyal analitik terhadap nilai yang ditentukan.

Dengan adanya data eksperimen dalam rentang besaran terukur yang luas S Dan B dapat diperkirakan dengan menggunakan metode kuadrat terkecil.

Untuk plot kalibrasi linier, nilainya S diambil sama dengan simpangan baku S a suku bebas persamaan grafik ini. Nilai batas kuantisasi yang diperoleh, bila perlu, dapat dipastikan dengan percobaan langsung pada besaran (konsentrasi) zat yang ditentukan mendekati nilai batas kuantisasi yang ditemukan.

Jika terdapat data tentang kemampuan suatu teknik untuk menentukan analit secara andal pada konsentrasi di atas dan di bawah norma kandungannya yang ditetapkan dalam spesifikasi, penentuan nilai sebenarnya dari batas kuantisasi untuk teknik tersebut, sebagai suatu peraturan, tidak diperlukan. diperlukan.

1. BIDANG ANALITIS DARI METODOLOGI

Area analisis teknik adalah interval antara nilai atas dan bawah dari karakteristik analitik komponen yang ditentukan dalam objek analisis (kuantitas, konsentrasi, aktivitas, dll). Dalam kisaran ini, hasil yang diperoleh dengan menggunakan metode yang divalidasi harus memiliki tingkat akurasi dan presisi yang dapat diterima di laboratorium (menengah).

Persyaratan berikut berlaku untuk ukuran area analitik metode:

– metode penentuan kuantitatif harus dapat diterapkan dalam kisaran 80 sampai 120% dari nilai nominal karakteristik analitis yang ditentukan;

– metode untuk menilai keseragaman dosis harus diterapkan dalam kisaran 70 sampai 130% dari dosis nominal;

– metode kuantisasi yang digunakan dalam uji Disolusi umumnya dapat diterapkan dalam kisaran 50 sampai 120% dari konsentrasi zat aktif yang diharapkan dalam media disolusi;

– metode uji kemurnian harus dapat diterapkan dalam kisaran dari “Batas Kuantitas” atau “Batas Deteksi” hingga 120% dari kandungan pengotor yang diizinkan yang ditentukan.

Ruang lingkup analitis dari teknik ini dapat ditentukan dari kisaran data eksperimen yang memenuhi model linier.

1. LINEARITAS

Linearitas suatu teknik adalah adanya ketergantungan linier sinyal analitik terhadap konsentrasi atau jumlah analit dalam sampel yang dianalisis dalam rentang analisis teknik tersebut.

Saat memvalidasi suatu metode, linearitasnya dalam domain analitik diperiksa secara eksperimental dengan mengukur sinyal analitik untuk minimal 5 sampel dengan jumlah atau konsentrasi analit yang berbeda. Data eksperimen diolah dengan metode kuadrat terkecil dengan menggunakan model linier:

kamu = B · X + A,

X– jumlah atau konsentrasi zat yang ditentukan;

kamu– besarnya respons;

B– koefisien sudut;

A– anggota bebas (OFS “Pemrosesan statistik hasil percobaan kimia”).

Nilai harus dihitung dan disajikan B, A dan koefisien korelasi R. Dalam kebanyakan kasus, ketergantungan linier yang memenuhi kondisi 0,99 digunakan, dan hanya ketika menganalisis besaran jejak ketergantungan linier yang dianggap 0,9.

Dalam beberapa kasus, kemungkinan perkiraan linier data eksperimen diberikan hanya setelah transformasi matematisnya (misalnya, logaritma).

Untuk beberapa metode analisis, yang pada prinsipnya tidak dapat didasarkan pada hubungan linier antara data eksperimen, konsentrasi atau jumlah suatu zat ditentukan dengan menggunakan grafik kalibrasi nonlinier. Dalam hal ini, ketergantungan sinyal analitik pada jumlah atau konsentrasi analit dapat didekati dengan fungsi nonlinier yang sesuai menggunakan metode kuadrat terkecil, yang dapat dilakukan dengan perangkat lunak tervalidasi yang sesuai.

1. BENAR

Kebenaran suatu teknik ditandai dengan penyimpangan rata-rata hasil penentuan yang dilakukan dengan menggunakan nilai yang diterima sebagai kebenaran.

Metode yang divalidasi dianggap benar jika nilai-nilai yang diterima benar terletak dalam interval kepercayaan dari hasil pengujian rata-rata yang sesuai yang diperoleh secara eksperimental dengan menggunakan metode ini.

Untuk menilai kebenaran metode kuantisasi, pendekatan berikut dapat diterapkan:

a) analisis menggunakan metodologi sampel standar atau campuran model yang telah divalidasi dengan kandungan (konsentrasi) zat yang ditentukan yang diketahui;

b) perbandingan hasil yang diperoleh dengan menggunakan metode yang telah divalidasi dan metode acuan yang kebenarannya telah ditetapkan sebelumnya;

c) pertimbangan hasil mempelajari linearitas metode yang divalidasi: jika suku bebas dalam persamaan yang diberikan pada Bagian 5 tidak berbeda nyata secara statistik dari nol, maka penggunaan metode tersebut memberikan hasil yang bebas dari kesalahan sistematis.

Untuk pendekatan “a” dan “b”, data yang diperoleh dapat disajikan dalam bentuk persamaan ketergantungan linier (regresi) antara nilai yang ditemukan secara eksperimental dan nilai sebenarnya. Untuk persamaan ini diuji hipotesis tentang persamaan garis singgung sudut kemiringan terhadap kesatuan B dan tentang persamaan dengan nol suku bebas A. Biasanya, jika hipotesis ini diakui benar dengan tingkat reliabilitas sebesar 0,05, maka penggunaan metodologi yang divalidasi memberikan hasil yang benar, yaitu bebas dari kesalahan sistematis.

1. PRESISI

Ketepatan suatu teknik dicirikan oleh dispersi hasil yang diperoleh dengan penggunaannya relatif terhadap nilai rata-rata hasil. Ukuran hamburan tersebut adalah nilai simpangan baku hasil penentuan individu, yang diperoleh untuk sampel yang berukuran cukup besar.

Presisi dinilai untuk setiap metode penentuan kuantitatif berdasarkan hasil setidaknya tiga penentuan untuk masing-masing dari tiga tingkat nilai yang ditentukan (bawah, tengah dan atas) yang berada dalam lingkup analitis metode tersebut. Pengulangan juga dapat dinilai untuk setiap prosedur kuantisasi berdasarkan hasil setidaknya enam penentuan untuk sampel dengan kandungan analit yang mendekati nominal. Dalam banyak kasus, presisi dapat dinilai berdasarkan hasil pengolahan data eksperimen menggunakan metode kuadrat terkecil, seperti yang ditunjukkan dalam Monograf Farmakope Umum “Pemrosesan statistik hasil eksperimen kimia”.

Presisi harus dipelajari pada sampel yang homogen dan dapat dinilai dengan tiga cara:

– sebagai keterulangan (konvergensi);

– sebagai presisi intra-laboratorium (menengah);

– sebagai presisi antar laboratorium (reprodusibilitas).

Hasil evaluasi teknik analisis untuk masing-masing pilihan presisi biasanya ditandai dengan nilai simpangan baku yang sesuai dari hasil penentuan tersendiri.

Biasanya, ketika mengembangkan metode asli, pengulangan (konvergensi) dari hasil yang diperoleh dengan menggunakannya ditentukan. Jika perlu untuk memasukkan metode yang dikembangkan dalam dokumentasi peraturan, presisi intra-laboratorium (menengah) juga ditentukan. Ketepatan antar laboratorium (reprodusibilitas) suatu metode dinilai berdasarkan pencantumannya dalam rancangan monografi farmakope umum, monografi farmakope, atau dalam dokumentasi peraturan untuk bahan referensi farmakope.

7.1 Pengulangan (konvergensi)

Pengulangan suatu teknik analisis dinilai dengan hasil independen yang diperoleh dalam kondisi teregulasi yang sama di laboratorium yang sama (pelaksana yang sama, peralatan yang sama, rangkaian reagen yang sama) dalam waktu singkat.

7.2 Ketepatan intralaboratorium (menengah).

Ketepatan intralaboratorium (menengah) dari metode yang divalidasi dinilai dalam kondisi pengoperasian satu laboratorium (hari berbeda, pemain berbeda, peralatan berbeda, dll.).

7.3 Presisi antar laboratorium (reprodusibilitas)

Ketepatan antar laboratorium (reprodusibilitas) dari metode yang divalidasi dinilai ketika pengujian dilakukan di laboratorium yang berbeda.

1. KEBERLANJUTAN

Stabilitas metode yang divalidasi adalah kemampuan untuk mempertahankan karakteristik yang ditemukan pada metode tersebut dalam kondisi optimal (nominal), yang diberikan dalam tabel, dengan kemungkinan penyimpangan kecil dari kondisi analisis ini.

Kekokohan suatu prosedur tidak boleh ditentukan dalam kaitannya dengan kondisi analitis yang mudah dikendalikan. Hal ini secara signifikan mengurangi kebutuhan akan studi keberlanjutan yang berdedikasi.

Stabilitas hanya boleh dipelajari bila prosedur yang divalidasi didasarkan pada penggunaan metode analisis yang sangat sensitif, seperti berbagai jenis kromatografi dan analisis fungsional. Jika perlu, stabilitas metodologi dinilai pada tahap pengembangannya. Jika stabilitas suatu metode kemungkinan besar rendah, kesesuaiannya harus diperiksa secara langsung pada saat penggunaan praktis.

Menguji kesesuaian sistem analitik

Validasi kesesuaian suatu sistem analitik adalah pemeriksaan pemenuhan persyaratan dasar sistem analitik. Sistem yang diuji kesesuaiannya adalah kumpulan instrumen, reagen, standar, dan sampel tertentu yang akan dianalisis. Persyaratan untuk sistem seperti itu biasanya ditentukan dalam monografi farmakope umum untuk metode analisis yang sesuai. Dengan demikian, pengujian kesesuaian sistem analisis menjadi suatu prosedur yang termasuk dalam prosedur yang divalidasi.

Presentasi hasil validasi

Protokol validasi prosedur analitis harus berisi:

– uraian lengkapnya, cukup untuk reproduksi dan mencerminkan semua kondisi yang diperlukan untuk melakukan analisis;

– karakteristik yang dinilai;

– semua hasil primer yang disertakan dalam pengolahan data statistik;

– hasil pengolahan statistik data yang diperoleh secara eksperimental selama pengembangan atau pengujian metode yang divalidasi;

– bahan ilustrasi, seperti salinan kromatogram yang diperoleh dengan kromatografi cair kinerja tinggi atau kromatografi gas; elektroforogram, spektrum elektronik dan inframerah; foto atau gambar kromatogram yang diperoleh dengan metode kromatografi lapis tipis atau kertas; gambar kurva titrasi, grafik kalibrasi;

– kesimpulan tentang kesesuaian metode yang divalidasi untuk dimasukkan dalam dokumen peraturan.

Disarankan untuk mendokumentasikan bahan validasi untuk metode analisis individual dalam bentuk laporan validasi gabungan.